Методы микроскопии применяемые в медицине

Хотя бы один раз в год все люди проходят медицинские осмотры. Но мало кто знает, что происходит с их анализами в лаборатории, и какие диагностические мероприятия с ними проводят. А ведь от правильного лабораторного обследования зависит не только здоровье, но иногда даже жизнь. Поэтому методы микроскопического исследования играют немаловажную роль в выявлении и своевременном предупреждении различных вирусных и инфекционных заболеваний.

Микроскопия и ее разновидности

Микроскопия – исследование объектов посредством микроскопа. Предназначена для изучения микроорганизмов, а также иных объектов, которые непостижимы человеческому глазу. Имеет следующую классификацию:

• Стереоскопическая.

Используется для исследования объектов под разными углами, при этом изучая их двумя глазами. Увеличение небольшое – 120-ти кратное. Такой вид микроскопии используют в оперативном лечении маленьких структур организма, которые недосягаемы для человеческого глаза; в изучении мёртвых тканей; в судебной медицине.

• Инфракрасная.

Принцип действия – поглощение непрозрачных объектов, структурами света, длина волн которых достигает 700-1200 нанометров. Чтобы провести инфракрасную микроскопию не нужно производить специальную химическую обработку объекта. Данный метод применяется в зоологии, науках о биологической природе человека. Используется микроскопия в медицине: инфракрасную микроскопию используют в нейрохирургических целях, а также при изучении глаз, их анатомии и физиологии.

• Ультрафиолетовая.

Изучает свойства объекта посредством определения длины волн, которые поглощают ультрафиолетовое излучение, являясь способностью отдельного вещества, клетки, ткани данного объекта. Такой способностью обладают биополимеры, которые хранят генетический код; нуклеиновые кислоты; пропионовые кислоты; альфа-аминокислоты; калиевая соль; продукты азотистого обмена; лекарственные вещества; кристаллические вещества с температурой плавления больше 290 градусов. Благодаря ультрафиолетовой микроскопии определяют место концентрации искомых веществ, а, если объект живой, то можно исследовать его структурные изменения в процессе жизнедеятельности.

• Люминесцентная.

Основной принцип работы – изучение объектов посредством их свойств свечения в ультрафиолетовых лучах или сине-фиолетовой части спектра. Большинство биологических веществ, например, белки, молекулы небелковой природы, низкомолекулярные органические соединения и лекарственные препараты имеют «врожденную» люминесценцию. Иные вещества светятся лишь после добавления конкретных красителей – синтетических соединений природного характера, которые начинают светиться при контакте с ультрафиолетовыми и синими лучами. Такой краситель может попадать в клетку при малейшем контакте, а может распределяться по клеткам избирательно, окрашивая при этом отдельные биосоединения изучаемого объекта. В мероприятиях, посвященных гистохимическим исследованиям, метод люминесцентной микроскопии – это единственный способ обнаружить вирусную концентрацию в клетках, изучить структуру распада продуктов обмена веществ, определить антигены и антитела. Лечение таких болезней, как герпес, гнойное поражение железистых органов, воспаление тканей печени, грипп – не обходится без люминесцентной микроскопии. Также, с ее помощью можно распознать злокачественную опухоль, предупредить сердечно-сосудистые заболевания, исследовать микрофлору слизистой оболочки носа и диагностировать вирусные недуги.

• Интерференционная.

Имеет общую структуру анализа с фазово-контрастной микроскопией, но в отличие от последней, где можно изучать лишь контуры исследуемого объекта, здесь появилась возможность делать микроскопическую экспертизу прозрачных объектов, а также брать количественный анализ. Такой результат появляется вследствие преломления луча света на два пучка: первый проходит через структурные компоненты изучаемого объекта, а второй минует их. В объективе микроскопа кажется, что оба пучка соединяются и налагаются друг на друга. Разница фаз, которая возникает, можно измерить посредством определения массы разнообразных клеточных структур. Если измерять данную разницу последовательно, используя показатели преломления, то можно узнать плотность, ширину и толщину изучаемых объектов и их тканей, содержится ли в них вода или иные компоненты, имеется ли в них белок. Химические и физические свойства мембран, активность ферментов, обмен веществ на клеточном уровне – это лишь малая часть того, что можно узнать благодаря интерференционной микроскопии.

• Фазово-контрастная.

Применяется при изучение живых неокрашенных объектов. Принцип действия – преломление луча света по отношению к излучаемому объекту. При этом видоизменяются размер и фаза волны. Фазово-контрастный микроскоп состоит из объектива с элементами, которые расщепляют поляризованный пучок света на несколько компонентов. Свет луча, который проходит сквозь объект через эти элементы, не изменяет свой цвет и амплитуду, но немного нарушается фаза его волны. Как вывод – разница размеров волн между проходящими сквозь объект лучами и световым фоном. В случае, если разница не меньше 0,25 длины волн – возникает изображение, на котором чёрный объект выделяется из светлого фона. Всё зависит от фазовой пластинки, встроенной в объектив микроскопа. Одним из подвидов данного метода микроскопии является амплитудно-контрастная, принцип действия которой строится лишь на изменении яркости и цветовой палитры фонового света. При этом улучшается качество изучения живых неокрашенных организмов. Своё применение амплитудно-контрастная микроскопия нашла в исследованиях заболеваний системы кровообращения; онкологии; биомедицины; паразитов, а также заболеваний, которые они вызывают; микробиологии и анатомии.

• Рентгеновская.

Применяется для исследования особо малых объектов, которые по своим размерам не больше рентгеновской волны (0,01-1 нм). Подразделяется на следующие подвиды: проекционная, работающая посредством источника излучения и регистрирующего устройства; отражательная – использует специальные монокристаллы, система зеркал, рассеянное на кристалле рентгеновское излучение.

Своё применение рентгеновская микроскопия нашла в изучении генезиса минералов, медицине, а также науке, изучающей химический состав и структуру металлов. Отличительной особенностью данного метода является возможность изучать непрепарированные живые клетки.

Этот рентгеноструктурный анализ может быть лазерным – когда изучаются одиночные молекулы и их связи.

• Поляризационная.
Лучи, которые появляются посредством поляризации двух взаимоперпендикулярных полостей, образуют свет, в котором исследуют различные объекты – это и есть принцип действия поляризационной микроскопии. Между источником излучения и объектом помещают специальные призмы с эффектом двойного лучепреломления, которые отражают электромагнитные и звуковые волны. В сочетании со специальным светофильтром, такая конструкция позволяет изучать анизотропные структуры клеток, микроскопические компоненты тканей, молекулярную организацию структуры объекта. Поляризационная микроскопия используется для исследования клеток и тканей растительных и животных организмов. Также применяется при идентификации возбудителя различных иммунных заболеваний; при изучении жизни клеток, их жизненно важных компонентов, их функций и процесса размножения. Основное назначение данного метода исследования – изучение животных и растительных тканей, минералов, анизотропных микрообъектов.
• Электронная.
Применяется в случае, если объект находится вне пределов видимости оптического микроскопа. Обычно, размер исследуемых образцов, которые изучаются данным методом – 1 микрон и менее. Принцип действия заключается в использовании потока отрицательно заряженных частиц, которые играют роль светового луча. Линзы в таком микроскопе – магнитные. Отдельные участки исследуемых объектов по-разному задерживают отрицательно заряженные частицы, поэтому изображение получается чёрно-белым, где сам объект увеличен в тысячи раз. Сегодня электронная микроскопия используется для изучения строения, функции и развития клетки. Также применяется в сферах исследования морфологии и структуры микроорганизмов, их жизнедеятельности и генетики. Немаловажный вклад данный метод внес в развитие такой науки как вирусология. Если бы не электронная микроскопия, законы жизнедеятельности клеток были бы до сих пор не изучены, а значит многие онкологические заболевания были бы неизлечимы.

Для того, чтобы провести электронную микроскопию, объекты, которые являются изучаемым материалом, подвергаются физической и химической фиксации, после чего их обезвоживают и разделяют на ультратонкие срезы, чтобы было легче их контрастировать и исследовать.

Электронная микроскопия позволяет увеличивать изображение объекта на много сотен тысяч раз. Минусом данного метода я является то, что он предназначен для изучения неактивных, обезвоженных, мёртвых объектов. Научный вклад в медицину этой методики микроскопии – очень велик, но применять ее в диагностических и практических целях – пока невозможно. Световая и электронная микроскопия имеет общий признак – увеличение изображения с последующим описанием форм объекта и сравнением этих форм с функциональными, а также химическими свойствами

• Иммуноэлектронная микроскопия.

Применяется для исследования взаимодействия антигена и антител. Принцип действия: материал, который исследуется смешивают с иммунной сывороткой, инкубируют его; жидкость и твердые частицы разделяются на фракции по плотности; затем происходит осаждение антител и разделенных частиц на объект; после этого, к смешанному клеточному осадку добавляют вещество, усиливающее контрастность; и только после всего этого, полученный препарат исследуют под микроскопом.

Применяется для диагностики вирусного гепатита, а также для выявления антигенов, которые будут бороться с различными вирусными заболеваниями.

• Световая.

Обеспечивает цветное изображение, увеличенное в две-три тысячи раз. Также, при световой микроскопии возможно продолжительное наблюдение за подвижным объектом, и что немаловажно – микрокиносъёмка. Используется для оценки хода развития объекта, его состояния движения, а также для исследования его изменений под воздействием окружающих его факторов. Кроме разрешающей способности микроскопа, важную роль играет амплитуда светового луча и типология исследуемого объекта, так как свойства последнего имеют огромное влияние на оптическое излучение: цвет, контрастность, резкость, световая фаза, плоскость, по которой распространяется волна. Именно благодаря этим факторам и строится методология микроскопических исследований, например, в данном виде микроскопии, объект окрашивают, чтобы определить его свойства, потому что краска помогает изучить конкретные свойства убитых клеток. Но это не значит, что световая микроскопия занимается изучением лишь мертвых биологических объектов. Благодаря темнопольной микроскопии (подвид оптической), где свойства и чёткость изображения зависит ли излучения, которое рассеивается исследуемым образцом, освещающий световой пучок не попадает в глазок, и картинку изучаемого образца учёные видят в рассеянном свете. Используется для изучения водных одноклеточных организмов, а также живых объектов, которые могут быть как окрашенными, так и наоборот.